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    TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(显色法)


    碧云天生产的显色法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(Colorimetric TUNEL Apoptosis Assay Kit)为您提供了一种高灵敏度又快速简便的细胞凋亡检测方法。对于待检测的细胞或组织样品,经过生物素标记和后续的DAB显色等步骤,即可在普通光学显微镜下观察到凋亡细胞。
    细胞在发生凋亡时,会激活一些DNA内切酶,这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测,可以发现180-200bp的DNA ladder。基因组DNA断裂时,暴露的3'-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase,TdT)的催化下加上生物素(Biotin)标记的dUTP(Biotin-dUTP),随后和辣根过氧化物酶(HRP)标记的Streptavidin (Streptavidin-HRP)结合,最后在HRP的催化下通过DAB显色来显示凋亡细胞,从而可以通过普通光学显微镜检测到凋亡的细胞,这就是TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法检测细胞凋亡的原理。
    本试剂盒有如下优点。(1)高灵敏度:背景染色极低,阳性染色强,可以在单细胞水平检测到细胞凋亡,同时由于凋亡早期就有 DNA断裂,可以检测到早期的细胞凋亡。(2)特异性好:TUNEL检测时通常更容易标记凋亡细胞,而不容易标记坏死细胞。(3)快速:仅需约2-3个小时即可完成。(4)应用范围广:可以用于检测冷冻或石蜡切片中的细胞凋亡情况,也可以检测培养的贴壁细胞或悬浮细胞的凋亡情况。(5) 实测效果好:参考图1。

    图1. 本试剂盒的检测效果图。A. HeLa细胞未处理或用DNase I室温孵育10分钟后的检测效果图。B. Hela细胞未处理或用10μM喜树碱(Camptothecin)处理24小时后的检测效果图。图中棕褐色为DAB染色阳性细胞。本图中的染色实验均在12孔板中进行。本图仅作参考,不同的样品不同的检测条件,实际获得的结果可能和上图有较明显的差别。

    TUNEL法特异性检测细胞凋亡时产生的DNA断裂,但不会检测出射线等诱导的DNA断裂(和细胞凋亡时的断裂方式不同)。这样一方面可以把凋亡和坏死区分开,另一方面也不会把射线等诱导发生DNA断裂的非凋亡细胞判断为凋亡细胞。
    极少数细胞凋亡时没有DNA断裂,此时不适用TUNEL法检测。在个别类型的坏死细胞中也发现TUNEL检测呈阳性。在需要严格判断细胞凋亡的情况下,最好同时检测多个凋亡指标。
    本试剂盒足够检测20个样品。 
    包装清单:

    产品编号 产品名称 包装
    C1091-1 TdT酶 100μl
    C1091-2 Biotin-dUTP 900μl
    C1091-3 TdT酶稀释液(选用) 500μl
    C1091-4 Streptavidin-HRP 22μl
    C1091-5 Streptavidin-HRP稀释液 1ml
    C1091-6 DAB显色液A 6ml
    C1091-7 DAB显色液B 6ml
    C1091-8 标记反应终止液 6ml
    — 说明书 1份

    保存条件:
    -20℃保存,DAB显色液A和DAB显色液B需避光保存。
    注意事项:
    需自备用于洗涤细胞的PBS或HBSS,用于封片的抗荧光淬灭封片液(P0126)等适当的封片液,用于固定的4%多聚甲醛或向碧云天订购免疫染色固定液(P0098),同时需自备含0.3% Triton X-100的PBS或向碧云天订购免疫染色强力通透液(P0097)。需自备过氧化氢。
    如果用于石蜡切片的检测,需自备蛋白酶K和二甲苯。蛋白酶K(ST533)可以向碧云天订购。
    DAB对人体有害,操作时请小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
    本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
    为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


    试剂

    • ·检测试剂盒
    • ·细胞实验
    • ·分子实验
    • ·免疫蛋白实验
    • ·通用
    • ·免疫实验
    • ·特殊试剂

    耗材

    • ·其他耗材
    • ·离心管
    • ·其他器皿
    • ·微孔板
    • ·细胞培养瓶
    • ·枪头
    • ·培养皿
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